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本文標(biāo)題:"觀察霉菌生長的顯微鏡出售!"

發(fā)布者:yiyi ------ 分類: 產(chǎn)品資訊 ------ 人瀏覽過-----時間:2012-7-4 0:12:20

 一、黴菌之篩選及鑑定

陳年期達(dá)一年以上中式火腿購自市售特產(chǎn)店。以滅菌用具及0.9 %生理食鹽水采集產(chǎn)品表面之黴菌,將檢體以馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基涂抹培養(yǎng)后,選取形態(tài)相異菌落,接種于Czapek-Dox培養(yǎng)基進(jìn)行形態(tài)觀察并依傅與周所采用的方法進(jìn)行菌種鑑定,并與黴菌顯微照片菌元之菌絲及孢子形態(tài)觀察進(jìn)行比對藉以初步篩選。
二、玻片鏡檢
于培養(yǎng)皿中盛裝鏡檢用載玻片,以滅菌玻棒沾Czapek-Dox broth置于單凹玻片的凹槽上,再以白金耳接菌于培養(yǎng)基邊沿,蓋上蓋玻片,于25℃,相對濕度90 %條件下進(jìn)行培養(yǎng),每日以顯微鏡觀察黴菌生長狀況并記錄其特征及顯微照相。
三、黃麴毒素試驗
(一)     螢光判讀法
依Fente et al.(2001法,以白金耳沾取黴菌菌落接種于含0.3 %β-cyclodextrin的YES培養(yǎng)基中,于28℃黑暗中培養(yǎng)7日,第3、5、7日取出,以360 nm螢光燈照射,觀察是否有藍(lán)色或綠色螢光產(chǎn)生。
(二)     HPLC確認(rèn)試驗
 黃麴毒素萃取:依Fente et al.(2001)法。秤取長黴之培養(yǎng)基10 g,裝入塑膠袋中,以
20 ml氯仿(1次10 ml)于鐵胃(Stomacher, Lab. Blender 400, England)拍擊均質(zhì)3分鐘,進(jìn)行黴菌毒素萃取。均質(zhì)2次后,以Whatman No. 4濾紙過濾。濾液以氮氣吹乾(flow rate: 5 ml/min),加入2 ml甲醇溶解,過濾后取0.5 ml濾液以等倍甲醇稀釋,進(jìn)行HPLC試驗。
 HPLC試驗:
  泵:日立7100型,日本。
  管柱:RP18e(5 mm)125 mm × 4 mm(Merck,德國)。
  移動相:46 %甲醇水溶液。
  流動速率:1 ml/min。
  螢光檢出器設(shè)定:激發(fā)波長(λex)365 nm,發(fā)散波長(λem)420 nm。
四、加工特性研究
(一)     淀粉活性:依Hankin and Anagnostakis(1975)之方法,以營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基加入0.2 %可溶性淀粉,調(diào)至pH 6.0,制成平板培養(yǎng)基,接種黴菌,培養(yǎng)3-5日后,以碘液滴入培養(yǎng)基中。若菌落周圍呈現(xiàn)黃棕色,表此菌分泌淀粉;若為藍(lán)紫色,則表不分泌此酵素。
(二)     脂肪活性:參考Hankin and Anagnostakis(1975)之方法,配制每升培養(yǎng)基中含有蛋白10 g,氯化鈉5 g,CaCl2·2H2O 0.1 g及瓊脂15 g,調(diào)整至pH 6.0,與Tween 20 (polyoxyethylene sorbitan monolaurate)分別殺菌后,每100 ml培養(yǎng)基中加入1 ml Tween 20,混合均勻制成平板培養(yǎng)基,接種黴菌,培養(yǎng)7日,每日觀察菌落周圍若有白色沈淀,即表Tween 20被水解后釋出月桂酸,與Ca2+形成白色鈣鹽沈淀,表該菌具脂肪分解活性。
(三)     中性蛋白活性試驗:依林與周(1998)修正之Anson法(Narahara et al., 1982),以白金耳沾取各菌株之菌落并于10 ml 0.9 %生理食鹽水中稀釋后,取1 ml加入含馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基12 %、蛋白1 %及氯化鈉0.5 %的液態(tài)培養(yǎng)基9 ml充分混合,每株菌株制備8試管之上述培養(yǎng)菌液于30℃培養(yǎng)7日,每日取出一試管進(jìn)行蛋白活性分析。取上述菌液及
0.2 M 磷酸鹽緩衝液(pH 7.0)各2 ml混合均勻,于30℃水浴預(yù)熱5分鐘,加入20 %脫脂還原乳2 ml在40℃水浴保持10分鐘,爾后加入4 ml之0.72 M三氯醋酸溶液。靜置20分鐘后過濾,取1 ml濾液,依Hull法(1947)測定其于660 nm之吸光值。再以酪胺酸之檢量線換算酪胺酸生成量。

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