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本文標題:"激光掃描顯微鏡采用了雙光子(和三光子)來激發"

發布者:yiyi ------ 分類: 行業動態 ------ 人瀏覽過-----時間:2016-12-25 22:32:41

激光掃描顯微鏡采用了雙光子(和三光子)來激發

 
     快掃描共聚焦顯微鏡可控程度不如線頂式(top of the line)
慢掃描顯微鏡掃描模式,有些以攝像速度成像的共聚焦顯微鏡不能
選用多波長照明。以攝像速度成像的顯微鏡要選用裂隙孔徑而不是
針孔孔徑,而前者的橫向及縱向分辨率較差。
    有一種快速掃描共聚焦顯微鏡,因為它價格低廉(還有其他原
因)值得一提,它用有多個針孔(約200 000個)的自旋盤同時照明來
檢測標本內多點的發射光。光源可以用激光器或那種用于傳統表面
熒光顯微鏡的寬光譜燈。這種共聚焦顯微鏡的主要優點在于它能較
快的采集圖像高達700幀/s,解線率(1ines resolution)為5000線
]。它的圖像可以直接用眼觀察,也可以用靈敏的相機照下來。它
的主要缺點在于自旋盤只能通過獲得光線的1%左右,原因在于自
旋盤內的孔需要較大的間隔。最近有一種新型自旋盤共聚焦顯微鏡
問世了,它用顯微透鏡來提高透光率,共聚焦成像速度高且靈敏度
也較高。
    另一種很有價值的激光掃描顯微鏡采用了雙光子(和三光子)激
發來誘導熒光產熒光團吸收兩個光子時產生雙光子激發,每個光子
各自擁有促使熒光團進入激發態的能量的一半。只有在焦點位置的
光強度才能滿足同時吸收雙光子的需求,所以只有焦平面上的熒光
團才能被激發。因此,在檢測儀前不安裝空問濾光片的情況下,雙
光子激發仍可以進行光切。此外,由于焦點外的熒光團不被激發,
所以與傳統的激光掃描顯微鏡相比,它的標本不容易發生光漂白。
與單光子激發相比,雙光子吸收用以激發可見光熒光團所需的波長
更長、組織穿透力更好,因此能檢測標本更深處的結構。另外,傳
統激光掃描顯微鏡選用紫外波長時,紫外熒光團成像會出現較多問
題,但如果使用雙光子激光掃描顯微鏡,則許多問題都不會發生。
目前雙光子共聚焦顯微鏡的一個缺點是合適的激光器的價格太高。
現在市場上已有雙光子掃描顯微鏡(Bio—Rad,Leica)。應用指南
成像參數的優化物鏡選擇
    由于大數值孔徑的物鏡比小數值孔徑的物鏡采光多(亮度相當
于NA4),所以通常熒光顯微鏡最好選用大數值孔徑的物鏡。大多數
高質量大數值孔徑的物鏡的可見光波長頁

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