本文標(biāo)題："顯微鏡帶有自動(dòng)照像設(shè)備-圖像型科研儀器"
發(fā)布者：yiyi ------ 分類: 行業(yè)動(dòng)態(tài) ------
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顯微鏡帶有自動(dòng)照像設(shè)備-圖像型科研儀器
在觀察過(guò)程中熒光會(huì)有所減弱，當(dāng)然如果將材料浸人抗減退
試課劑，如Vectashield，可以大大減少這種熒光的減弱。因此盡
快地拍攝記錄下圖像是十分重要的。由于用于激發(fā)DAPI的高能量的
短波長(zhǎng)光，例如近UV／紫色，要比用于顯示德克薩斯紅和羅丹明的
較低能量的長(zhǎng)波長(zhǎng)光更快地使熒光染料漂白，因此建議首先拍攝紅
色熒光信號(hào)然后再拍攝綠色熒光，最后是藍(lán)色熒光圖像。拍攝ISH
熒光可能比較困難，因?yàn)橥ǔ晒庑盘?hào)僅占圖像框的一小部分，并
且背景黑暗。如果顯微鏡帶有自動(dòng)照像設(shè)備，它是根據(jù)整個(gè)拍攝視
野的光來(lái)計(jì)算曝光的，取的是熒光和周?chē)诎祬^(qū)域的平均值。因此
會(huì)使照片曝光過(guò)度。使用點(diǎn)測(cè)量設(shè)備或者在照相機(jī)上的暗視野設(shè)置
，或是手動(dòng)控制曝光時(shí)間，這個(gè)問(wèn)題即可迎刃而解。還有一種辦法
，即在預(yù)期曝光設(shè)置以下至少選兩個(gè)設(shè)置曝光。對(duì)于明亮的ISH信
號(hào)，其曝光時(shí)間大概在10-30s左右。對(duì)于較弱的信號(hào)，例如低拷貝
探針的信號(hào)，可能曝光時(shí)間要達(dá)到5min。DAPI圖像通常比ISH信號(hào)
亮得多，則僅要曝光數(shù)秒即可。·
·陽(yáng)性對(duì)照 陽(yáng)性對(duì)照是用來(lái)證明所使用的變性、雜交及檢測(cè)
試劑均反應(yīng)正常。
如果陽(yáng)性對(duì)照反應(yīng)正常而試驗(yàn)的載玻片卻失敗，就表明試驗(yàn)用
的探針有問(wèn)題，
并非是ISH反應(yīng)本身的問(wèn)題。陽(yáng)性對(duì)照包括那些靶序列已知在
試驗(yàn)材料中以
多拷貝存在的探針，如核糖體DNA探針。
·陰性對(duì)照
——用來(lái)確定非特異性標(biāo)記的程度。不使用任何探針或者用一
個(gè)在試驗(yàn)材料中
不存在的不相干的探針，或者用未標(biāo)記的目的DNA序列進(jìn)行實(shí)
驗(yàn)
——用來(lái)確定探針雜交的特異性。在不同的嚴(yán)緊性條件下進(jìn)行
實(shí)驗(yàn)。
隨著嚴(yán)緊性的增加，雜交位點(diǎn)的數(shù)量會(huì)減少。在較高的嚴(yán)緊性
條件下，留下
的只有那些與目的序列相對(duì)應(yīng)的特異的雜交位點(diǎn)疑難解答
由于ISH的時(shí)間較長(zhǎng)，步驟較多，不可避免地會(huì)產(chǎn)生很多問(wèn)題
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