本文標(biāo)題："葉綠體DNA酶解實(shí)驗(yàn)-鑒定體細(xì)胞圖像顯微鏡"
發(fā)布者：yiyi ------ 分類: 技術(shù)文章 ------
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葉綠體DNA酶解實(shí)驗(yàn)-鑒定體細(xì)胞圖像顯微鏡
細(xì)胞器基因組
細(xì)胞器基因組包括葉綠體DNA(cpDNA)和線粒體DNA(mtDNA)。可
以用合適的細(xì)胞器DNA探針與待定的雜種細(xì)胞總DNA進(jìn)行雜交，或者
檢查富集純化的細(xì)胞器DNA的限制性酶解圖譜的方法，對(duì)體細(xì)胞雜
種與其融合親本的細(xì)胞器DNA進(jìn)行比較。比較的結(jié)果就可以用以判
定融合產(chǎn)物中的葉綠體或線粒體是否與融合親本的一方或雙方相同
，或者是新的一種。用克隆的cpDNA或mtDNA片段對(duì)酶解的總DNA進(jìn)
行Southern雜交，是一種鑒定體細(xì)胞雜種細(xì)胞器基因組的較好的方
法，它僅需少量的植物材料。但是，要注意的是，不同的細(xì)胞器DN
A之間可能會(huì)具有一定的同源性，因此會(huì)產(chǎn)生非特異的信號(hào)。
cpDNA的分離主要有兩步：
·分離完整的葉綠體。
·從葉綠體中提取cpDNA。
要得到高質(zhì)量、高產(chǎn)量的cpDNA，最重要的是優(yōu)化第一步。而在
第一步中，勻漿和梯度離心又是很重要的步驟。如果用Waring勻漿
器勻漿產(chǎn)生大量的泡沫和破碎的葉綠體，那么可以用剃須刀片把組
織切成薄條，釋放出葉綠體。如果用梯度離心收集葉綠體結(jié)果不大
令人滿意，可以嘗試不同的蔗糖濃度或者用PercoU梯度。
如果葉綠體DNA酶解后，在凝膠上有很強(qiáng)的背景，那么可以嘗
試甲基化敏感的限制性內(nèi)切酶(例如：Smal工和Pstl)，因?yàn)樗鼈儍?yōu)
先酶解非甲基化的cpDNA和mtD-NA。而核DNA由于帶有大量的甲基化
限制性位點(diǎn)，用這些酶幾乎不能酶解。
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